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SWD-4000高温电泳胶的基本原理是什么?

2020-03-21 08:53:07

提取DNA分子后,需要用电泳技术测定其量和质量。随着琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶被引入核酸研究,以相对分子质量大小分离DNA的凝胶电泳技术已发展成为分析鉴定DNA分子的重要实验手段。琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是基因操作的核技术之一,可用于DNA片段的分离,鉴定和纯化。该技术操作简单快捷,已成为DNA重组,DNA核苷酸序列分析,DNA限制性内切酶分析及限制性酶切图等多种通用分子生物学研究方法的技术基础。当某一分子放置在电场中时,它们以一定的速度移动到适当的电极,该电泳分子在电场中的移动速度称为电泳迁移率。这与电场的强度和电泳分子自身具有的纯电荷数成正比。也就是说,电场强度越大,电泳分子具有的纯电荷数越多,移动速度也越快,相反,移动速度也越慢。

由于在电泳中使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等无反应活性的稳定支持介质,使对流运动降低,因此电泳的移动率还与分子摩擦系数成反比。众所周知摩擦系数是分子大小,极性以及介质粘度的函数,因此根据分子大小的不同,结构和形状也不同,以及所持有的纯电荷的多少,可以通过电泳将蛋白质和核酸分子混合物中的各种成分相互分离。在生理条件下,核酸分子的糖磷酸骨架中的磷酸基处于离子状态,从这个意义上讲,DNA和RNA多核苷酸链被称为聚阴离子。因此,核酸分子放置在电场中时,会向正电极的方向移动。糖由于磷酸骨架结构上的重复性质,相同数量的双链DNA具有基本相同量的净电荷,能够以同样的速度向正电极方向移动。在一定的电场强度下,DNA分子的这种移动速度,即电泳的移动率依赖于核酸分子本身的大小和配置,分子量小的DNA分子比分子量大的DNA分子移动得快。这是利用凝胶电泳技术分离DNA片段的基本原理。


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